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    免疫组化步骤

    发布时间: 2020-04-29  点击次数: 857次
    1. 脱蜡:切片放入二甲苯1,二甲苯2,二甲苯3,各10分钟,无水乙醇1,无水乙醇2,无水乙醇3各2分钟,流水冲洗5分钟。
    2. 修复:高压锅内加入2000毫升柠檬酸钠修复液,加热至沸腾后将切片放入并加盖,压力阀转动后开始计时3分钟,自然冷却至室温。
    3. 洗涤:Pbs洗涤3次,每次5分钟。
    4. 阻断:3%过氧化氢室温阻断10分钟。
    5. 洗涤:Pbs洗涤3次,每次5分钟。
    6. 封闭:2.5%山羊血清室温封闭1小时,甩去封闭液再加入一抗,4度过夜。
    7. 洗涤:Pbs洗涤3次,每次5分钟。
    8. 二抗:加入对应二抗,室温孵育30分钟。
    9. 洗涤:Pbs洗涤3次,每次5分钟。
    10. 显色:dab显色1-2分钟,显微镜下观察至有明显阳性,用去离子水终止反应。
    11. 复染:苏木素复染2分钟,再用流水冲洗。
    12. 分化:盐酸乙醇分化1-2秒,再用流水冲洗。
    13. 蓝化:稀氨水蓝化10秒,再用流水冲洗。
    14. 脱水:75%乙醇,85%乙醇,95%乙醇,无水乙醇1,无水乙醇2梯度脱水,每次5分钟。
    15. 透明:二甲苯1,二甲苯2,二甲苯3透明,每次5分钟。
    16. 封片:中性树胶封片后,烘箱中烤干,显微镜下观察。

    实验试剂

    1,柠檬酸钠修复液     货号:自配液

    2,PBS                货号:自配液

    3,山羊抗兔二抗       货号:vector mp-7452

    4,dab                货号:中杉金桥 zli-9018

    一抗:

    α-sma                货号:ab124964             实验比例:1:1000

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