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    什么是多克隆抗体?与单克隆抗体有哪些区别?

    发布时间: 2020-09-14  点击次数: 1683次

    1.多克隆抗体与单克隆抗体的基本概念 
    克隆:指无性繁殖细胞系,是由单一的祖先细胞分裂繁殖而形成的一簇细胞纯系。在这个家族的所有成员中,如无突变发生,基因是完全相同的。 
    多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb):用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物,可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物。 
    单克隆抗体(monoclonal antibodies, mAb):由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体。高度均一、特异性强、效价高、少或无交叉反应性。 

     

    2. 多克隆抗体与单克隆抗体的制备比较 

    多克隆抗体制备的主要流程包括:①制备抗原;②选择实验动物;③动物免疫;④试取血进行测试,看看是否成功免疫;⑤如果成功免疫,处死实验动物,采集全部血清;⑥纯化出抗体;⑦鉴定抗体,包括纯度以及特异性。

    与单抗制备的区别  经过特定抗原处理过的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞通过细胞融合的方法得到杂交瘤细胞,经HAT培养基筛选、ELISA检测效价后就得到阳性克隆株,后进行细胞培养或将细胞注入到动物(一般为balb/c小鼠)腹腔中用腹水培养,收集上清/腹水纯化后就能得到单克隆抗体。而制备多克隆抗体就没有单克隆抗体繁琐,只需将抗原(纯度越高越好)直接注入到动物体内进行免疫,经过3至4次免疫,ELISA测其效价合格后,收集血液离心得到上清,纯化后即能得到多克隆抗体。因此多抗制备的周期就比单抗制备的短,*制备价格也比单抗要低。

     

    3. 多克隆抗体与单克隆抗体的应用比较 
    (1)多克隆抗体的应用 

    一种良好的多克隆抗血清含有抗某种抗原不同表位的多种抗体。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗体,包括变性—抗性的表位,所以,在深固定的样本中也会发挥效应,在石蜡包埋组织切片的染色中,多克隆抗体常选用。根据实验的不同需要,多克隆抗体应用于相应抗原的标记。此外,在农业生产中,多克隆抗体被用于农药残留现场监测;在临床应用中,多克隆抗体主要用于病原物的检测、疾病的诊断及治疗,如作为蛋白类免疫抑制剂用于移植反应和自身免疫病的治疗。

    (2)单克隆抗体的应用 

    单克隆抗体可用于分析抗原的细微结构及检验抗原抗体未知的结构关系;生产出针对复杂生物混合物中的特定分子的抗体,可用于分离、分析及纯化该特定分子抗原;其试剂可用于临床诊断和治疗,或用于以单抗为弹头的“生物”药物,直接导向肿瘤等。自Mathe于1958年*将抗鼠白血病免疫球蛋白与氨甲喋呤(MTX)交联用于导向治疗以来,相继出现了多种化疗药物与各种抗体的免疫耦合物,药物与单抗直接交联、药物通过小分子交联剂与单抗连接及药物通过大分子载体与单抗相连形成免疫耦合物,促进了分子导向药物的研制工作从实验室走向临床并广泛应用于疾病治疗。

    4. 多克隆抗体与单克隆抗体的其他比较 

     

     单克隆抗体多克隆抗体
    特异性较强较弱
    稳定性相对较差,对理化条件敏感较好
    对免疫原的要求不纯的免疫原也能得到高纯度的抗体免疫原纯度越高越好
    标准化易于标准化,批次间差异小较难,不同批次的抗体质量差异大
    识别仅检测抗原上的一个表位能识别多个表位
    交叉反应不易与其它蛋白发生交叉反应很常见,难避免非特异反应
    沉淀和凝集反应大多数没有
    制备成本较高较低
    制备周期较长较短
    价格较高较低

    图3   多抗和单抗的区别

     

     

     

     

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