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基因条件性敲除

基因条件性敲除

更新时间:2021-05-13

访问量:124

厂商性质:经销商

简要描述:
产品简介
细胞中有一类基因是维持存活*的,称为必需基因。直接敲除必需基因会导致细胞死亡,因而无法获得目的基因敲除的细胞。基因条件性敲除为研究这一类基因的功能提供了帮助。
品牌其他品牌产地类别进口
应用领域生物产业,制药

技术简介

       细胞中有一类基因是维持存活的,称为必需基因。直接敲除必需基因会导致细胞死亡,因而无法获得目的基因敲除的细胞。基因条件性敲除为研究这一类基因的功能提供了帮助。

       基因条件性敲除主要通过染色体位点特异性重组酶系统实现,如Cre-loxp,Flp-FRT,Dre-Rox等,其中常用的是Cre-loxp系统。在待敲除目的基因序列两端各插入一个loxp序列,得到Floxed(flanked  by  loxp)细胞。在细胞未表达CRE重组酶时,该基因是正常表达的。当细胞中转入Cre重组酶后,两个loxp位点之间的序列会发生重组删除,从而实现目的基因的敲除,研究人员可以在基因敲除到细胞死亡这段时间内进行观察和研究。

 

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应用范围

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适用于致死基因的研究,如当基因敲除导致细胞无法增值,存活等 选择合适的启动子调控Cre重组酶的表达,可以实现特定条件下目的基因的敲除

 

方案选择

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拥有多种荧光筛选标记,结合流式分选,可提高获得阳性目的细胞的概率 在细胞不产生耐药的情况下,可提供多种药筛标签,满足不同实验需求。

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应用案例

   细胞名称:C3H10T1/2

  基因名称:Ndufa13

   项目方案:构建Cas9/sgRNA和Donor质粒,转染目的细胞,通过流式分选GFP和mCherry阳性细胞,挑选单克隆,经鉴定后进行扩增,得到Ndufa13基因条件性敲除的单克隆细胞株。

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阳性细胞鉴定:通过对流式分选筛选出的单克隆细胞进行PCR及测序鉴定,Ndufa13基因第3外显子两侧的内含子中各插入一个loxp,获得Ndufa13条件性敲除的单克隆细胞株。

 

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项目流程与周期

 

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交付标准

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按方案构建的目的基因编辑细胞株,每个目的细胞株交付基因型正确的2个克隆,每个克隆2支冻存细胞(1*106cells/支) 对应野生型对照细胞 项目报告及质检报告
 

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